▲ 圖1 手性

  構(gòu)型的測(cè)定是X射線晶體學(xué)研究的一個(gè)重要方向，在很多領(lǐng)域有很多重要的應(yīng)用。例如，許多活性藥物原料藥是手性化合物。原料藥構(gòu)型的分離是藥品生產(chǎn)企業(yè)和藥品生產(chǎn)企業(yè)十分關(guān)心的問(wèn)題。因?yàn)椴煌膶?duì)映體具有不同的生理特性，錯(cuò)誤的對(duì)映體可能會(huì)造成非常嚴(yán)重的后果。如發(fā)生在上世紀(jì)50年代到60年代的沙利度胺“海豹兒”的悲劇。

  沙利度胺（反應(yīng)停）是德國(guó)ChemieGrünenthal公司研究的一種具有中樞神經(jīng)鎮(zhèn)靜作用的藥物，能夠顯著抑制妊娠反應(yīng)(如嘔吐和失眠)。當(dāng)時(shí)藥學(xué)界對(duì)其評(píng)價(jià)是：沒(méi)有任何副作用的抗妊娠反應(yīng)藥物，孕婦的理想選擇。然而在1960年，臨床陸續(xù)發(fā)現(xiàn)歐洲新生兒的畸形比率異常升高，并且與沙利度胺的使用有關(guān)。終研究發(fā)現(xiàn)沙利度胺作為一個(gè)手性化合物，其R-構(gòu)型具有抑制妊娠反應(yīng)活性，而S-構(gòu)型會(huì)導(dǎo)致孕婦流產(chǎn)甚至對(duì)新生兒有致畸性。當(dāng)時(shí)用于臨床的沙利度胺沒(méi)有將兩者拆分，以對(duì)映異構(gòu)體混合物的形式制備成藥。結(jié)果妊娠早期服用對(duì)胎兒產(chǎn)生了致畸作用。

  ▲ 圖片來(lái)自網(wǎng)絡(luò)

  X射線晶體學(xué)測(cè)定結(jié)構(gòu)/構(gòu)型，利用的是反常散射的方法。一般來(lái)說(shuō)原子越重，X射線波長(zhǎng)越長(zhǎng)，反常散射信號(hào)就越明顯。晶體的反常散射能力可以用Friedifstat參數(shù)來(lái)表征，通常分子在Mo靶下的反常散射能力只是Cu靶的六分之一。大多數(shù)藥物分子均為輕原子（原子序數(shù)< O）組成的有機(jī)分子，反常散射信號(hào)十分微弱，所以坊間流傳著一個(gè)“定律”：分子中必需含有重于P原子的元素，才能用Mo靶測(cè)定構(gòu)型，否則只能用Cu靶來(lái)測(cè)定。然而這個(gè)“定律”不應(yīng)該被遵循為的真理。確實(shí)，Cu靶的X射線波長(zhǎng)較長(zhǎng)，在測(cè)定反常散射信號(hào)有明顯的優(yōu)勢(shì)，但這不代表Mo靶無(wú)法對(duì)輕原子分子進(jìn)行構(gòu)型的測(cè)定。很多發(fā)表的數(shù)據(jù)都證實(shí)了這一點(diǎn)。

 ▲ 圖2

  圖2 不同波長(zhǎng)下，O原子的相對(duì)散射因子隨著分辨率的變化。藍(lán)線為Mo靶，紅線為Cu靶。黑色虛線為Cu靶分辨率極限。

 圖片來(lái)源EduardoC etal. The use of MoKα radiation inthe assignment of the absolute configuration of light‐atommolecules; the importance of high‐resolution data. ACTAB. 2014.1)

  輕原子構(gòu)型的測(cè)定是基于統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法，獨(dú)立的衍射點(diǎn)越多，分辨對(duì)映異構(gòu)體的能力也就越大。不管晶體質(zhì)量多好，Cu靶只能采集到大約0.78 Å的數(shù)據(jù)，而Mo靶則可以采集到高達(dá)0.36 Å的數(shù)據(jù)。在同樣的2theta角范圍內(nèi)，Mo靶可以收集10倍的獨(dú)立衍射點(diǎn)數(shù)量。因此，Mo靶反常散射較弱的缺點(diǎn)可以用數(shù)倍的獨(dú)立衍射點(diǎn)數(shù)目來(lái)彌補(bǔ)。另外，因?yàn)榉闯Ｉ⑸湫?yīng)是角度不依賴(lài)的，在Mo靶高分辨率的區(qū)域，反常散射信號(hào)在衍射點(diǎn)的強(qiáng)度中的相對(duì)貢獻(xiàn)(Δf/f)在不斷的增加（圖.2）。因此，從理論上Mo靶對(duì)輕原子分子構(gòu)型的測(cè)定*可行，不能被一句“不可靠”而被否定。

  儀器的進(jìn)步，在不斷地推動(dòng)著研究的速度和質(zhì)量。新一代的D8 VENTURE單晶衍射儀配備了高強(qiáng)度的微焦斑IμS3.0 Mo靶光源，并且配備了超大面積，超高檢測(cè)效率，靈敏度，超高數(shù)據(jù)精度的 PHOTON II/III CPAD探測(cè)器，因而可以在短時(shí)間內(nèi)，采集到高達(dá)0.4 Å 分辨率的數(shù)據(jù)，且不顯著增加數(shù)據(jù)收集的時(shí)間。高分辨率的數(shù)據(jù)不僅可以測(cè)定晶體結(jié)構(gòu)和構(gòu)型，還可以提供超高精度的鍵長(zhǎng)，鍵角信息，以及探究原子世界電荷密度的秘密。雖然之前的很多的文章都證明了Mo靶測(cè)定輕原子分子構(gòu)型的可行性，但自己做次數(shù)據(jù)，才會(huì)有親身的體驗(yàn)。

  那么利用新的D8 VENTURE IμS 3.0 PHOTON II，我們可以獲得什么樣的數(shù)據(jù)質(zhì)量和速度呢？

實(shí)驗(yàn)儀器

D8 VENTURE IμS 3.0 Mo PHOTON II

晶體

仍舊使用咖啡糖胞中的蔗糖，切出大小約為0.15 × 0.1 × 0.1 mm的晶體。

實(shí)驗(yàn)參數(shù)

低角度曝光1s/0.5°，高角度2s/0.5°，采集分辨率0.45 Å，目標(biāo)多重度 4，整體數(shù)據(jù)采集時(shí)間 1h。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

  ▲ 圖3，數(shù)據(jù)采集和結(jié)構(gòu)解析

  雖然晶體不大，但在2s的曝光下，該晶體的分辨率可達(dá)到0.4Å以上。終結(jié)構(gòu)精修使用XL配合APEX3*的*的IDEAL Multipolar精修孤對(duì)電子和成鍵電子，R1 = 2.47 % (I> 2σ(I)); wR2 = 6.54 % (all data)，F(xiàn)lack x: 0.05(10); Parsons z:-0.06(10); Hooft y:  0.04(9)。 

  在多重度只有3.8的情況下，Mo靶測(cè)定的Flack x， Hooft y， Parsons z以及偏差都*測(cè)定構(gòu)型的標(biāo)準(zhǔn)，并且與Cu靶測(cè)定的結(jié)構(gòu)*一致。

高分辨率數(shù)據(jù)的重要性

  高分辨率的數(shù)據(jù)在構(gòu)型測(cè)定中的貢獻(xiàn)在Eduardo C.發(fā)表的文章中有詳細(xì)的討論（https://doi.org/10.1107/S2052520614014498）。文中進(jìn)行了大量的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。高分辨率的數(shù)據(jù)可明顯降低Flack x，Hooft y， Parsons z的偏差，并且提供超高精度的鍵長(zhǎng)信息。如果繼續(xù)收集高多重度的數(shù)據(jù)，可以在高分辨率下，去研究電子云的細(xì)節(jié)，比如成鍵方向等。由于原理較復(fù)雜，在此不再詳細(xì)介紹（其實(shí)是因?yàn)檫€沒(méi)有看懂..），如感興趣可以參閱相關(guān)的資料。

▲圖4 Mo靶0.45 Å和0.83 Å的數(shù)據(jù)比較，以及電荷密度研究

總結(jié)

  當(dāng)然很多情況下，晶體數(shù)據(jù)的分辨率并不由儀器的靶材來(lái)決定，而是晶體本身的質(zhì)量。Mo靶進(jìn)行有機(jī)分子的構(gòu)型的鑒定，對(duì)晶體的質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)條件都有非常高的要求。Cu靶進(jìn)行有機(jī)分子的構(gòu)型研究，仍舊在原理上有很大的優(yōu)勢(shì)。不過(guò)既然Mo靶有可能，不妨試一試，說(shuō)不定在高分辨率的領(lǐng)域，您能有更神奇的發(fā)現(xiàn)。